Slider

Аллергодиагностика

Автор: Super User вкл. . Опубликовано в Лаборатория

Аллергией в мире страдает 10-30% населения. Диагностика аллергических заболеваний направлена на определение ведущего механизма развития болезни и спектра причинно-значимых аллергенов. В зависимости от ведущего механизма развития,  выделяют 4 основные типа аллергических (иммунопатологических) реакций:
-1 тип– немедленные реакции (атопические), опосредованные специфическими IgE-антителами, образующимися при иммунном ответе на соответствующие аллергены
-2 тип– цитотоксический, опосредованный антителами классов М и G 
-3 тип– иммуннокомплексный
-4 тип– клеточно-опосредованный с участием сенсибилизированных Т-лимфоцитов

Основными преимуществами методов специфической лабораторной  диагностики  являются:
-безопасность для пациента
-одномоментное исследование широкого спектра аллергенов
-проведение исследования в период обострения заболевания и на фоне противоаллергической терапии

Лабораторная  аллергодиагностика является предпочтительной в следующих случаях:
-ранний детский возраст
-непрерывно рецидивирующее течение заболевания без периодов ремиссии или период обострения болезни
-невозможность отмены антигистаминных препаратов, кетотифена и пр. (исключение составляют системные глюкокортикостероиды, при лечении которыми возможны ложноотрицательные результаты лабораторного обследования)
-резко измененная реактивность кожи 
-уртикарный дермографизм

Определение уровня общего IgE 
IgE участвует в аллергических реакциях немедленного типа и противогельминтом иммунитете. Преимущественно находится в связанном с рецепторами виде в тканях. В сыворотке присутствует в минимальных количествах. Высокие значения общего IgE в сыворотке крови выявляются при различных аллергических заболеваниях, глистных инвазиях, аутоиммунной патологии, гипер- IgE-синдроме, ряде вирусных инфекций. У 20% больных с аллергическими заболеваниями уровень общего IgE может быть в норме. 
-Материал для исследования – сыворотка крови.
-Метод определения – ИФА
.

Определение специфических IgE
Выявление в крови пациентов  специфических IgE является основным методом определения спектра причинно-значимых аллергенов при аллергии немедленного типа. От качества определения  специфических IgE во многом зависит эффективность профилактики и лечения аллергии.

С 2008 года  в нашей лаборатории проводится тестирование аллергенспецифических IgE с использованием технологии ImmunoCAP, являющейся «Золотым стандартом» в специфической аллергодиагностике, на автоматическом анализаторе фирмы “Phadia AB” (Швеция), позволяющая определять уровень специфических IgE как к различным смесям аллергенов, так и к отдельным аллергенам, составляя индивидуальные панели (более 500 тестов). Технология ImmunoCAP основана на иммунофлюоресцентном методе, в которой аллергены сорбированы на  трехмерой основе целлюлозной губки, что увеличивает поверхность связывания специфических антител.  

Для врачей разных специальностей представляет интерес  возможность проведения  скринингового аллерготестирования (Phadiatop), направленного на подтверждение  аллергического характера болезни (ринита, дерматита, крапивницы, бронхиальной астмы) . аллергоскрининг дает информацию о наличии в крови больного антител класса Е к наиболее распространенным аллергенам.  Мы предлагаем   скрининг-тест:  

Phadiatop:  перхоть кошки, перхоть собаки, клещ домашней пыли, пыльца злаковых, деревьев, сорных трав. 

Скрининговое тестирование направленно на подтверждение  аллергического характера заболевания. Положительный результат теста при наличии характерных клинических и анамнестических данных указывает на аллергическую природу воспаления. Отрицательный результат не исключает аллергии. 

Для  более углубленного исследования проводится диагностика по следующим панелям, с последующей расстановкой: 
Рыбная панель №1:
  смесь (треска, лосось, креветки, мидии, тунец)
Рыбная панель №2:  смесь (треска, лосось, креветки, мидии, тунец), форель, кальмар, гребешок, сельдь, рак, скумбрия;
Рыбная панель №3:  треска, лосось, креветки, мидии, тунец
Мясная панель №1: смесь (свинина, говядина, курятина, индюшатина)
Мясная панель №2: смесь (свинина, говядина, курятина, индюшатина), баранина, кролик;
Мясная панель №1: свинина, говядина, курятина, индюшатина
Фруктово-ягодная панель №1:  смесь (апельсин, яблоко, банан, персик)
Фруктово-ягодная панель №2:  смесь (земляника, груша, лимон, ананас), 
Фруктово-ягодная панель №3:  смесь (киви, дыня, банан, персик, ананас)  
Фруктово-ягодная панель №4:  апельсин, яблоко, банан, персик
Фруктово-ягодная панель №5:  земляника, груша, лимон, ананас 
Фруктово-ягодная панель №6:  киви, дыня, банан, персик, ананас
Панель-напитки №1:  чай, кофе, молоко
Панель-напитки №2:  чай, кофе, какао, виноград, солод, казеин, молоко
Пищевая панель №1: смесь (яичный белок, коровье молоко, треска, пшеница, арахис, соя)
Пищевая панель №2: яичный белок, коровье молоко, треска, пшеница, арахис, соя
Пищевая панель №3: смесь (пшеница, рожь, ячмень, рис)
Пищевая панель №4: пшеница, рожь, ячмень, рис
Пищевая панель №5: смесь (пшеница, рожь, ячмень, рис), овес, гречиха
Пищевая панель №6: смесь (базилик, смесь фенхеля, имбирь, анис)
Пищевая панель №7: базилик, смесь фенхеля, имбирь, анис
Молочная панель №1: молоко коровье, молоко козье, молоко кипяченое, α-лактоальбумин, β-лактоглобулин, казеин
Прочие пищевые аллергены: яйцо цельное, овомукоид, овальбумин, глютен, дрожжи, виноград, арбуз, красная смородина, вишня, слива, малина, шампиньоны, горох, огурец, семя подсолнуха, салат-латук, просо посевное, кукуруза
Грибковая панель №1: смесь (Penicillium notatum, Cladosporium herbarum, Sapergillus fumigates, Candida albicans, Alternaria alternata, Helminthosporium halodes)
Грибковая панель №2: смесь (Penicillium notatum, Cladosporium herbarum, Sapergillus fumigates, Candida albicans, Alternaria alternata, Helminthosporium halodes), Malassezia spp., Mucor racemosus
Грибковая панель №3: Penicillium notatum, Cladosporium herbarum, Sapergillus fumigates, Candida albicans, Alternaria alternata, Helminthosporium halodes, Malassezia spp., Mucor racemosus
Эпидермальная панель №1: смесь (перхоть лошади, кошки, коровы, собаки)
Эпидермальная панель №2: перхоть лошади, коровы, собаки, перхоть и эпителий кошки
Прочие аллергены: волнистый попугайчик (помет, перья, сывороточные белки), дафния (корм для рыб)
Бытовая панель №1: смесь (D.pteronyssinus, D. farina, таракан рыжий, домашняя пыль – Hollister-Stier) 
Бытовая панель №2: D.pteronyssinus, D. farina, таракан рыжий, домашняя пыль – Hollister-Stier
Гельминтная панель: аскарида, эхинококк, анизакида
Панель профессиональных аллергенов №1: изоцианат HDI, изоцианат MDI, изоцианат TDA, латекс, фталевый ангидрид, формальдегид/формалин, хлорамин Т
Панель профессиональных аллергенов №2: латекс, хлорамин Т
Инсектная панель: яд пчелы, осы, комара 
Прочие аллергены: табак, сперма, хлопок, шелк
Пыльца злаковых трав №1: смесь (ежа, овсяница, плевел, тимофеевка, мятлик)
Пыльца злаковых трав №2: ежа, овсяница, плевел, тимофеевка, мятлик
Пыльца сорных трав №1: смесь (амброзия голометельчатая, полынь обыкновенная, подорожник ланцетовидный, марь белая, лебеда чечевицевидная)
Пыльца сорных трав №2: амброзия голометельчатая, полынь обыкновенная, подорожник ланцетовидный, марь белая, лебеда чечевицевидная
Пыльца деревьев №1: смесь (клен, береза, дуб, вяз, орех)
Пыльца деревьев №2: клен, береза, дуб, вяз, орех
Прочие аллергены деревьев: тополь, сосна, можевельник
Прочие аллергены: табак, сперма, хлопок, шелк, эвкалипт, горох, арбуз, огурец, семя подсолнечника, салат-латук. 
-Забор крови проводится натощак. Материал для исследования – сыворотка. Метод исследования – хемилюминесценция (ImmunoCAP).
-Не рекомендуется проведение исследований на фоне иммуносупрессивной терапии (цитостатики, глюкокортикоиды, лучевая терапия) вследствие угнетения синтеза  антител.

Триптаза – фермент, содержащийся в гранулах тучных клеток, высвобождающийся при их активации. Триптаза является высокоспецифичным маркером тучных клеток, его уровень в крови отражает степень активации тучных клеток. В отличие от гистамина, который быстро метаболизируется  после высвобождения из активированных клеток и изменение его содержания в крови практически не заметны, максимально повышенный уровень триптазы определяется в течение 3 часов после немедленной реакции и диагностируется в течение 24 часов. Однако, триптаза, в отличие от гистамина, определяется в крови примерно через 15-30 минут после контакта с аллергеном. Повышенный уровень триптазы в крови подтверждает немедленный тип генерализованной реакции, хотя нормальный уровень ее не исключает. После проведения провокационной пробы с аллергеном уровень триптазы может быть также повышен.
-Забор крови проводится натощак. Материал для исследования - сыворотка.
-Метод исследования – хемилюминесценция (ImmunoCAP).

ЕСР – катионный белок эозинофилов, обладающий токсическими свойствами в отношении гельминтов и других клеток организма, высвобождающийся при активации эозинофилов и участвующий в активации тучных клеток. Высокий уровень ЕСР является неблагоприятным фактором для пациентов с астмой.   
-Забор крови проводится натощак. Материал для исследования - сыворотка.
-Метод исследования – хемилюминесценция (ImmunoCAP).
Распространенным лабораторным методом определения уровня специфических IgE  также является иммуноферментный анализ (ИФА), характеризующийся высокой чувствительностью (>90%), специфичностью и эффективностью. С помощью ИФА производится количественное (в условных единицах) или полуколичественное (реакция оценивается в интервале 1-4 классов) определение аллергенспецифических иммуноглобулинов класса Е (IgE) в крови больного. Полученные данные характеризуют  уровень сенсибилизации пациента к различным аллергенам.  

Тесты  RIDAAllergyScreen («R-Biopharm», Германия) основаны на принципе иммунного блота. Специфические аллергены связаны с поверхностью нитроцеллюлозной мембраны и расположены в виде тестовых полос. Каждая мембрана заключена в пластиковый корпус и содержит определенный набор аллергенов для тестирования. Оценка результатов проводится на приборе RIDAX-Screen. Уровень IgЕ выдается в международных единицах (IU/ml). 

Класс IU/ml Концентрация Ige
0 0-0.34 Отсутствие или ниже уровня
1 0.35-0.69 Пороговый уровень
2 0.7-3.49 Умеренный увеличенный уровень
3 3.50-17.49 Значительно увеличенный уровень
4 17.5-49.99 Высокий уровень
5 50.0-99.99 Очень высокий уровень
6 >100 Исключительно высокий уровень


Респираторная панель №1 (20 аллергенов): клещи D.farinae, D.pteronyssinus, ольха, береза, лещина, дуб, смесь трав (колосковые), рожь, полынь, подорожник, кошка, собака, лошадь, морская свинка, золотистый хомячок, кролик, Penicillium notatum, Cladosporium herbarum, Аspergillus fumigates, Alternaria alternata. 

Педиатрическая панель (20 аллергенов): клещи D.farinae, D.pteronyssinus, береза, смесь трав (колосковые), кошка, собака, Alternaria alternatа, молоко, α-лактоальбумин, β-лактоглобулин, казеин, яичный белок, яичный желток, бычий сывороточный альбумин, соевые бобы, морковь, картофель, пшеничная мука, лесные орехи, арахис.

Универсальная панель №5 (40 аллергенов): клещи D.farinae, D.pteronyssinus, ольха, береза, лещина, дуб, смесь трав (колосковые), рожь, полынь, подорожник, кошка, собака, лошадь, морская свинка, золотистый хомячок, кролик, Penicillium notatum, Cladosporium herbarum, aspergillus fumigates, Alternaria alternatа, лесные орехи, арахис, грецкие орехи, миндальные орехи, молоко, яичный белок, яичный желток, казеин, картофель, сельдерей, морковь, томаты, треска, крабы, апельсины, яблоки, пшеничная мука, ржаная мука, кунжутное семя, соевые бобы. 
-Забор крови проводится натощак. Материал для исследования - сыворотка. Метод исследования – иммуноблот.
-Не рекомендуется проведение исследований на фоне иммуносупрессивной терапии (цитостатики, глюкокортикоиды, лучевая терапия) вследствие угнетения синтеза  антител.

Наряду с ИФА, в Самаре только в «Лечебно-диагностическим центре Иммунологии и Аллергологии» проводится аллергологическое обследование более современным, чувствительным и экономичным методом  множественной хемилюминесценции (MAST) с использованием автоматического анализатора (реактивы фирмы «Hitachi Chemical Diagnostics, inc.», Нидерланды). Аллергены нанесены на целлюлозные нити, заключенные в пластиковые тест-камеры. Уровень IgЕ выдается в люминесцентных единицах (LU).

Класс LU Концентрация Ige
0 <11 Неопределяемая
1/0 >11 Очень низкая
1 >26 Низкая
2 >65 Умеренная
3 >145 Высокая
4 >242 Очень высокая

Универсальная панель №4 (36 аллергенов):  Alternaria, Aspergillus, Candida, Cladosporium, Mucor, Penicillium, ольха, береза, овсяница, рожь, тимофеевка, лебеда, одуванчик, яблоки, говядина, морковь, пищевые злаки (кукуруза, овес, рис), куриное мясо, треска, яйцо цельное, фундук, молоко коровье, свинина, картофель, соя, клубника, томаты, пшеница, перья, собака, кошка, таракан, домашняя пыль,   D.farinae, D.pteronyssinus.

Пищевая IgE-панель (35 аллергенов):  миндаль, бананы, бобы, говядина, морковь, капуста (белокочанная, брокколи, цветная), сельдерей, куриное мясо, шоколад, треска, яичный белок, яичный желток, чеснок, молоко, грибы, лук репчатый, апельсин, горох, арахис, свинина, картофель, изюм, рис, рожь, морские продукты (моллюски, креветки, крабы), соя, тыквенные (цуккини, тыква), сахар (тростниковый, свекольный), томаты, тунец, индейка, орех грецкий, пшеница, кукуруза, дрожжи кондитерские.   

Основные  показания к проведению аллергологического обследования:
-поллиноз (пыльцевая аллергия)
-частые «простудные» заболевания на фоне нормальной температуры тела
-бронхиальная астма
-атопический дерматит, крапивница, ангионевротический отек
-рецидивирующие отеки гортани, обструктивный ларингит и эпиглотит у детей
-увеит, конъюктивит
-хронический риносинуит
-пищевая  и лекарственная непереносимость
-стойкая эозинофилия крови и секретов

-Забор крови проводится натощак. Материал для исследования – сыворотка крови. Метод исследования – хемилюминесценция (MAST).
-Не рекомендуется проведение исследований на фоне иммуносупрессивной терапии (цитостатики, глюкокортикоиды, лучевая терапия) вследствие угнетения синтеза  антител.

В клинической практике встречаются патологические состояния, например пищевая аллергия, при которых недостаточно проведение аллергологических диагностических проб и определения in vitro общего и специфических IgE-антител, т.к. механизмы этих заболеваний обусловлены также и другими типами аллергических реакций, связанных с гиперпродукцией специфических IgG-антител (реактивы фирмы«Biomerica», США).  Реакция на пищу могут возникать через несколько  часов или  дней. IgG -зависимая реакция на продукты встречается более часто, но редко диагностируется и плохо отвечает на лечение. Кожные тесты с пищевыми аллергенами в этом случае отрицательные, уровень общего IgЕ нормальный, специфические IgЕ в крови не определяются. Симптомы замедленной пищевой аллергии развиваются минимум через 2 часа, но чаще спустя несколько дней, что затрудняет  определение причины этой реакции. Пациенты получают на руки документ о наличие специфических антител к пищевым антигенам и полностью исключают их из своего рациона питания на 3-6 месяцев. При полном исключении аллергенов концентрация аллерген-специфических антител снижается, и постепенно тест становится отрицательным. В дальнейшем эти продукты снова могут быть введены в рацион питания. 

Пищевая IgG - панель (90 аллергенов): молоко коровье, молоко козье, сыр чеддер, йогурт, масло сливочное, яичный белок, яичный желток, брынза, швейцарский сыр, мягкий сыр, свинина, баранина, говядина, индейка, курица, кролик, кальмары, палтус, креветки, тунец, хек, лосось, крабы, сардины, форель, камбала, треска, устрицы, овес, рис, соевые бобы, пшено, гречневая крупа, пшеница, рожь, ячмень, фасоль стручковая, томаты, капуста цветная, черный перец, авокадо, баклажан, морковь, чеснок, огурец, кукуруза, шампиньоны, горошек зеленый, дыня канталупа, оливки, картофель, перец чили, сельдерей, тыква, капуста брокколи, фасоль пятнистая, перец зеленый капуста, лук, петрушка, свекла, виноград белый, грейпфрут, груша, персик, слива, апельсин, ананас, банан, земляника, лимон, голубика, яблоко, орех колы, арахис, кунжут, миндаль, семя подсолнечника, грецкий орех, табак, сахар тростниковый, черный чай, кофе, шоколад, мед, глютен, казеин, β-лактоглобулин, дрожжи пекарские, дрожжи пивные.        

Наша лаборатория предлагает комбинацию тестов на гиперчувствительность немедленного и замедленного типов пищевой аллергии АлПи-тест:
-Пищевая панель 90 аллергенов + Универсальная панель №4
-Пищевая панель 90 аллергенов + Универсальная панель №5    

Показания для проведения АлПи-теста:
-бронхиальная астма
-крапивница, дерматит, экзема
-нарушение пищеварения
-заболевания суставов
-отеки и задержка жидкости
-ринит
-нарушение обмена веществ
-избыточный вес
-депрессия
-бессонница, апноэ, храп
-головные  боли
-повышенная возбудимость
-железодефицитная анемия
-быстрое старение

-Забор крови проводится натощак. Материал для исследования – сыворотка крови.
-Не рекомендуется проведение исследований на фоне иммуносупрессивной терапии (цитостатики, глюкокортикоиды, лучевая терапия) вследствие угнетения синтеза  антител.

Диагностика лекарственной аллергии
Тест торможения естественной эмиграции лейкоцитов (ТТЕЭЛ)
 - основан на возникновении аллергического воспаления слизистой полости рта при повторном контакте с лекарством, при этом сенсибилизированные лимфоциты продуцируют лимфокины, влияющие на миграцию индикаторных клеток (гранулоциты, моноциты, макрофаги).

Показания для проведения ТТЕЭЛ:
-непереносимость лекарственных препаратов в анамнезе
-атопические заболевания при показаниях к применению медикаментозной терапии
-подтверждение лекарственной аллергии в клинике профессиональных болезней

Подготовка пациента к проведению теста ТТЕЭЛ: 
-Перед проведением теста             необходимо    отменить прием ГКС и цитостатиков за 2-4 недели, антигистаминных препаратов за 4 дня, кетотифена или задитена за 2 надели.                              
-Во время проведения теста запрещается принимать пищу, пить, курить, принимать алкоголь.
-В день исследования отменяются все лечебные процедуры, в том числе, лекарства.
-В день проведения теста прием пищи и чистка зубов проводится не позднее, чем за час до процедуры.   
Противопоказания к проведению ТТЕЭЛ:
-Острая стадия воспалительных заболеваний полости рта
-Полное отсутствие зубов
-Острые аллергические заболевания

Определение специфических IgE методом ИФА (биотинилированные аллергены):
«Стоматологическая №1»:
  лидокаин/ксилокаин,  артикаин/ультракаин
«Стоматологическая №2»: 
Лидокаин (ксилокаин),  артикаин (ультракаин),   мепивакаин (полокаин),  бупивакаин (анекаин/маркаин),  эпинефрин
«Противовоспалительные средства  №1»:   ацетилсалициловая кислота,  парацетамол,  анальгин
«Хирургическая №1»:   анальгин, лидокаин (ксилокаин)
«Хирургическая №2»:   анальгин, лидокаин (ксилокаин),  алкурониум,  атропина сульфат,  суксаметониум
«Сердечно-сосудистые средства №1»:    гидрохлоротиазид (арифон),  метопролол,  каптоприл,  эпинефрин
«Анестетики +»: Лидокаин (ксилокаин),  артикаин (ультракаин),   мепивакаин (полокаин),  бупивакаин (анекаин/маркаин),  эпинефрин, анальгин, алкурониум,  атропина сульфат,  суксаметониум, ацетилсалициловая кислота

Прочие аллергены: эхинацея

Определение специфических IgE методом ИФА (диски):
Лекарственная панель №1 «Антибиотики»:
 Пенициллин G, Пенициллин V, Цефалоспорин, Линкомицин, Тетрациклин, Гентамицин, Эритромицин

Лекарственная панель №3  «Нестероидные противовоспалительные средства»: Ацетилсалицилловая кислота, Бутадион, Ибупрофен, Диклофенак, Парацетамол, Индометацин, Метамизол

Лекарственная панель №4 «Хирургическая»: Тиопентал, Фуросемид, Лидокаин, Ампициллин, Шёлк, Фенобарбитал, Ибупрофен

Лекарственная панель №5 «Пульмонологичеcкая»: Амброксол, Бромгексин, Ацетилцистеин, Эритромицин, Тетрациклин, Лидокаин

Определение специфических IgE методом хемилюминесценции (ImmunoCAP):
Лекарственная панель:
  амоксицикллин,  ампициллин,  пенициллин G, пенициллин V

Прочие аллергены: сукцинилхолин, инсулин свиной, инсулин коровий, инсулин человеческий

-Забор крови проводится натощак. Материал для исследования – сыворотка крови.
-Не рекомендуется проведение исследований на фоне иммуносупрессивной терапии (цитостатики, глюкокортикоиды, лучевая терапия) вследствие угнетения синтеза  антител.